TRỪU TƯỢNG

TÀI LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

KẾT QUẢ

 

Một xu hướng tăng MIC terbinafine cho phân lập tuần tự được hiển thị.

Để xác nhận rằng MIC terbinafine cao là độc lập với phương pháp loãng nhạy cảm kháng nấm được sử dụng, chúng tôi reassayed các T. rubrum phân lập cho độ nhạy terbinafine của họ bằng cách sử dụng một phương pháp canh macrodilution do NCCLS M27-A giao thức ( 21 ) và so sánh dữ liệu với những người thu được bằng xét nghiệm nước dùng pháp pha loãng. Như thể hiện trong Bảng Table1,1 , cả hai pháp pha loãng và macrodilution xét ​​nghiệm cho thấy các chủng kháng với terbinafine. Điều thú vị là, không giống như các phương pháp pháp pha loãng, cho thấy rằng MIC mà 80% chủng bị ức chế là 4 mg / ml cho các chủng tuần tự, không phân biệt số lần bệnh nhân, phương pháp macrodilution cho thấy MIC tăng dần với mỗi khi truy cập , từ một MIC của 4 mg / ml cho cô lập từ chuyến thăm bệnh nhân đầu tiên một trong những> 128 mg / ml cho cô lập từ chuyến thăm bệnh nhân thứ tám. Các MFCs xác định cho các tế bào của cả pháp pha loãng và các phương pháp macrodilution được nâng cho tất cả các phân lập tuần tự so với những người dễ bị căng thẳng cho tài liệu tham khảo NFI năm 1895. Các MFCs không thay đổi cho phân lập từ các chuyến thăm liên tiếp (Bảng (Bảng 1).1 ). Do đó, các dữ liệu macrodilution khảo nghiệm xác nhận rằng các chủng đã kháng tiểu học và mở rộng các quan sát cho thấy tiếp xúc với ma túy đã dẫn đến tăng sức đề kháng.

BẢNG 1.

MIC và MFCs của terbinafine cho T. rubrum phân lập

 

Phân tích RAPD cho thấy tuần tự T. rubrum phân lập được đại diện bởi một dòng duy nhất.

Để xác định xem phân lập tuần tự đại diện cho một dòng đơn hoặc dòng khác nhau cho thấy nhiễm mới mỗi khi truy cập, chúng tôi thực hiện phân tích RAPD để phát hiện sự khác biệt trong mô hình khuếch đại trong các phân lập. Khác biệt đáng kể trong mô hình dải sẽ đề nghị rằng các bệnh nhiễm trùng trong quá trình điều trị terbinafine được gây ra bởi các chủng nonidentical. Như hình. Hình 1,1 , T. rubrum NFI 5146 (cô lập đường cơ sở, thu được từ bệnh nhân trước khi điều trị đã được khởi xướng) và T. rubrum NFI 5147, NFI 5150, và NFI 5151 (thu được từ cùng một bệnh nhân trong chuyến thăm 2, 7, và 8, tương ứng) có mô hình tương tự như dải. Sự căng thẳng tài liệu tham khảo (ATCC 18.759) đã có một hồ sơ ADN tương tự, khác với những gì của phân lập lâm sàng bởi chỉ có một ban nhạc (Hình (Hình 1,1 , ngõ 2). Sự khác biệt này không được xem là quan trọng ( 3 , 23 ) . Cô lập NFI năm 1895 (chủng tham khảo) và cô lập NFI 5148 và NFI 5149 (thu được trong chuyến thăm 3 và 4, tương ứng) cũng đã dải mô hình tương tự như của các phân lập tuần tự khác (dữ liệu không hiển thị). Do đó, phân lập được tại thăm tuần tự đại diện cho một dòng duy nhất của T. rubrum .

FIG. 1.

Phân tích RAPD của terbinafine chống tuần tự T. rubrum phân lập.Ngõ 1 (M), kích thước phân tử đánh dấu (0,1-21,2 kbp); ngõ 2, ATCC 18.759 (tham khảo dòng); ngõ 3, NFI 5146 (căng thẳng cơ sở); ngõ 4, NFI 5147 (thăm 2); ngõ 5, NFI 5150 (thăm 7); ...

 

Terbinafine chống T. rubrum phân lập không phát triển kháng chéo với azoles và griseofulvin.

Trong một nỗ lực để đạt được cái nhìn sâu sắc hơn nữa vào mức độ và phổ kháng thuốc trong các tuần tựT. rubrum phân lập, tính nhạy cảm của họ để kháng nấm đường uống được sử dụng trên lâm sàng bao gồm itraconazole và griseofulvin được xác định bởi cả pháp pha loãng và các phương pháp macrodilution. Như thể hiện trong Bảng Table2,2 , tất cả các phân lập được thử nghiệm tính nhạy cảm bình thường để trưng bày hai azoles và griseofulvin (Bảng (Bảng 2).2 ). Hơn nữa, MIC của tất cả ba thuốc kháng nấm cho phân lập được trong các chuyến thăm liên tục vẫn như nhau. Như vậy, kết quả của chúng tôi cho thấy T. rubrum chủng là đặc biệt khả năng chống terbinafine.

BẢNG 2.

MIC của azoles và griseofulvin cho tuần tự T. rubrum phân lập

 

Terbinafine chống T. rubrum phân lập hoàn toàn chéo kháng với các chất ức chế squalene epoxidase khác.

Mục tiêu của terbinafine trong các tế bào nấm là squalene epoxidase enzyme, được tham gia vào việc chuyển đổi squalene để epoxide squalene, một tiền chất trong sinh tổng hợp ergosterol ( 10 , 24 ). Để xác định xem các chủng terbinafine chống phân lập được qua kháng với các chất ức chế squalene epoxidase khác, tính nhạy cảm của một cô lập được ở lần 2 (NFI 5147) và cô lập thứ hai thu thập được ở lần 7 (NFI 5150) để ức chế squalene epoxidase được biết đến (naftifine [một allylamine], butenafine [một benzylamine], và tolnaftate và tolciclate [thiocarbamates]) đã được xác định ( 10 ). Các độ nhạy cảm của các chủng tham khảo hai, chủng ATCC 18.759 và NFI năm 1895, để các chất ức chế tương tự đã được thử nghiệm cùng một lúc. Như đã nêu trong Bảng Bảng 3,3 , các MIC của các chất ức chế squalene epoxidase thử nghiệm là cao đối với hai chủng terbinafine chịu, trong khi các chủng tài liệu tham khảo là rất dễ bị các chất ức chế (Bảng (Bảng 3).3 ). Những nghiên cứu cho thấy các phân lập terbinafine chịu hoàn toàn chéo kháng với các chất ức chế squalene epoxidase khác.

BẢNG 3.

MIC và MFCs các chất ức chế squalene epoxidase cho ba T. rubrumphân lập

THẢO LUẬN

Gần kiểm tra dữ liệu lâm sàng cho thấy bệnh nhân có phân lập được đánh giá trong nghiên cứu này là một nam 31 ​​tuổi là hoàn toàn tuân thủ phác đồ điều trị, không có điều kiện y tế đáng kể, không được dùng bất cứ loại thuốc khác trong điều trị terbinafine, và đã không nhận được điều trị kháng nấm trước.Các MIC terbinafine trong sáu T. rubrum phân lập lâm sàng điều tra trong nghiên cứu này đã được xác nhận là khoảng 3 đơn đặt hàng của các cường độ cao hơn bình thường. Thực tế là MIC cho cô lập đường cơ sở (NFI 5146) là khoảng 4.000 lần cao hơn bình thường cho thấy sức đề kháng đã không phát triển như là kết quả của việc tiếp tục điều trị. Vì vậy, đây rất có thể là một ví dụ về kháng chính để terbinafine, xác nhận bằng cách sử dụng hai phương pháp thử nghiệm tính nhạy cảm kháng nấm (loãng và macrodilution kỹ thuật). Điều thú vị là kết quả thu được bằng xét nghiệm macrodilution cho thấy MIC tăng lên trong quá trình điều trị, ngụ ý rằng sức đề kháng đã bị trầm trọng thêm bởi tiếp xúc kéo dài với thuốc. Ngược lại, không có sự khác biệt trong tính nhạy cảm trong sáu phân lập khi các thủ tục pháp pha loãng đã được sử dụng. Mặc dù tầm quan trọng của sự khác biệt này là không rõ ràng và có thể là do sự khác biệt giữa hai phương pháp, kết quả từ việc khảo nghiệm canh macrodilution hỗ trợ khả năng tiếp xúc lâu dài của một tác nhân gây bệnh đã kháng với terbinafine dẫn đến thay đổi thứ biểu hiện như tăng sức đề kháng .

Phát hiện của chúng tôi cho thấy các chủng terbinafine chịu được xác định trong nghiên cứu này không phát triển khả năng kháng azoles và griseofulvin. Các loại thuốc chống nấm có chế độ khác nhau của hành động. Azoles (fluconazole và itraconazole) ức chế sự tăng trưởng của nấm bằng cách ngăn chặn P450 loại enzyme 14α-demethylase cytochrome tham gia vào sinh tổng hợp ergosterol ( 12 , 14 , 25 ), trong khi griseofulvin ảnh hưởng đến phân chia tế bào và sự hình thành sợi nấm bằng cách phá vỡ trục chính và chức năng tế bào chất vi ống ( 1 , 8 , 9 ). Terbinafine đặc biệt ức chế squalene epoxidase, ngăn chặn sự tổng hợp của squalene epoxide từ squalene và dẫn đến sự tích tụ của mức độ độc hại của squalene và giảm mức sản xuất ergosterol ( 20 , 24 ). Nồng độ squalene trong tế bào cao được cho là can thiệp vào chức năng màng nấm và tổng hợp thành tế bào ( 24 ). Squalene epoxidase không phải là một loại enzyme của các loại cytochrome P450, vì vậy, sự ức chế tiềm năng của lớp này của các enzym có thể tránh được ( 24 ). Như vậy, quan sát không kháng chéo với azoles và griseofulvin được quan sát thấy trong các phân lập terbinafine chịu là không đáng ngạc nhiên.

Dữ liệu của chúng tôi cho thấy rằng mặc dù các phân lập terbinafine chịu là hoàn toàn dễ bị azoles và griseofulvin, chúng kháng với một số thuốc ức chế epoxidase squalene (naftifine, butenafine, tolnaftate, và tolciclate). Quan sát này chỉ ra rằng các phân lập có một cơ chế chung của kháng liên quan đến epoxidase squalene. Việc phát hiện ra các phân lập terbinafine chịu là hoàn toàn chéo kháng với một số lớp học của các chất ức chế squalene epoxidase nhưng hiển thị nhạy cảm bình thường để azoles và kháng nấm khác cho thấy sức đề kháng có thể là kết quả của một đột biến ở gen mã hóa squalene epoxidase trong T. rubrum . Nghiên cứu sinh học phân tử và sinh hóa hơn nữa sẽ được yêu cầu làm sáng tỏ đầy đủ điểm này. Tần số thấp phát hiện dermatophytes trưng bày kháng terbinafine cho thấy rằng đây không phải là một nguyên nhân phổ biến của sự thất bại điều trị. Tuy nhiên, những phát hiện của nghiên cứu này chứng minh rằng chủng dermatophyte terbinafine chịu có thể tồn tại và có thể, nhân dịp, là lý do cho sự thiếu đáp ứng lâm sàng với thuốc.